本生快訊| ELISA實驗標(biāo)本應(yīng)如何采集、處理及保存?

　　ELISA作為免疫學(xué)，能及時和經(jīng)濟(jì)地測定和量化樣品中的抗原或抗體，被視為生物樣品定量檢測的金標(biāo)準(zhǔn)。為了獲取最準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，應(yīng)盡可能消除其他類因素帶來的誤差和影響，因此需要參照各類不同樣本的處理和保存辦法進(jìn)行實驗前準(zhǔn)備 。BUNSEN本生本文將為大家準(zhǔn)備了一份ELISA樣本收集/保存/運輸?shù)南嚓P(guān)資料。

　　ELISA進(jìn)行臨床檢驗常見的樣本一般包括血清、血漿、尿液、糞便、細(xì)胞、動物組織、植物組織、胸腹水、腦脊液、肺泡灌洗液等，這些樣本的收集、處理的方法和保存都有一定的要求，如果處理不當(dāng)，會直接影響到之后的正式試驗。

　　一、樣本的收集及處理方法

　　1、血清

　　干燥管(黃色)或促凝管(紅色)收集全血，室溫自然凝固10-20min，離心5-10min(2500-3500rpm)。采血過程中應(yīng)避免溶血，仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心;

　　注意事項：根據(jù)自身實驗需要，取適量上清液可進(jìn)行ELISA測定。 請注意指標(biāo)說明書上對于抗凝血劑是否有特殊要求，如有特殊要求，需按照說明書提示進(jìn)行操作，建議使用EDTA。血漿中除含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成分均與血清相同。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑EDTA，因為抗凝不的標(biāo)本會因纖維蛋白原干擾實驗而造成假陽性。

　　2.血漿

　　抗凝管(紫色、黑色、綠色)收集全血，采集后馬上混勻，靜置10min左右，離心5-10min(2500-3500rpm)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心;

　　3.尿液

　　用無菌管收集，離心10-20min(2500-3500rpm)，仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心;

　　4.糞便

　　用無菌 15ml 離心管收集, 1g 樣本+9ml PBS(0.01M，pH=7.4)，充分勻漿完離心5-10min(2500-3500rpm/min)，取上清備用;

　　5. 細(xì)胞

　　檢 測 分 泌 性 的 成 份 ： 用 無 菌 管 收 集 ， 5-10min(2500-3500rpm)，仔細(xì)收集上清;

　　細(xì)胞內(nèi)指標(biāo)：吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，胰酶消化細(xì)胞，收集細(xì)胞沉淀，PBS(0.01M，PH=7.4)清洗一次，PBS 稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 1×106個/ml 左右，充分研磨后超聲裂解(用超聲細(xì)胞破碎儀，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重復(fù)4～5次)，或反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，離心5-10min(2500-3500rpm)，取上清備用;

　　6.動物組織

　　用無菌 15ml 離心管收集, 組織重量不能低于 50mg，1g 組織加入 9ml PBS(0.01M，PH=7.4)，手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，勻漿過程中，PBS 分 2 次加進(jìn)去，這樣勻漿更充分。充分勻漿完離心 5-10min(2500-3500rpm/min)。取上清備用(切勿加入細(xì)胞裂解液);

　　7.植物組織

　　用無菌15ml離心管收集, 組織重量不能低于 50mg，1g 組織加入 9ml PBS(0.01M，PH=7.4)，手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，勻漿過程中，PBS 分 2 次加進(jìn)去，這樣勻漿更充分。充分勻漿完離心 5-10min(2500-3500rpm)。取上清備用(切勿加入細(xì)胞裂解液);

　　8.牛奶

　　8000rpm 高速離心，離心后分三層，層是脂肪層，中間層是乳清，底層是固態(tài)蛋白，取中間層保存?zhèn)溆?。乳清量參照血清量;

　　9.胸腹水、腦脊液、肺泡灌洗液

　　處理方法同尿液。

　　注意事項

　　1)不能檢測含NaN?的樣品，因NaN? 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性;

　　2)收集血液應(yīng)避免產(chǎn)生溶血現(xiàn)象。紅細(xì)胞破碎，釋放大量的過氧化物酶，會影響ELISA檢測中的辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)的酶促反應(yīng)，造成檢測結(jié)果的不確定性;

　　3)在檢測前，冷凍過的樣本應(yīng)緩慢地融化并離心除去凍融過程產(chǎn)生的沉淀物，室溫混勻后使用;

　　4)若使用化學(xué)裂解液制備組織勻漿或細(xì)胞提取液，由于引入某些化學(xué)物質(zhì)會導(dǎo)致ELISA測值出現(xiàn)偏差;

　　5)對于組織勻漿、組織全蛋白、細(xì)胞提取液等蛋白提取樣本，經(jīng)BCA法測定樣本蛋白含量后，建議進(jìn)行蛋白濃度的統(tǒng)一化，避免因組織重量、細(xì)胞數(shù)、產(chǎn)物體積等因素造成的人為誤差。

　　二、樣本的保存與運輸

　　保存

　　樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測可保存于2-8℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融。

　　運輸

　　使用冰袋或干冰運輸，確保運輸?shù)竭_(dá)里面的冰袋或干冰未融化，運輸時間應(yīng)盡量短。

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